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    堿裂解法質(zhì)粒抽提試劑盒的原理是什么?

    發(fā)布時(shí)間: 2022-06-08  點(diǎn)擊次數(shù): 3012次

    這次講解堿裂解法,從大腸桿菌中抽提質(zhì)粒的基本原理。


    我們將搖菌得到的混合物離心,去除培養(yǎng)基,就可以獲得大腸桿菌,加入溶液1重懸。溶液1含緩沖成分,和抑制Dnase的EDTA。加入溶液2,含NaOH和SDS。在強(qiáng)堿環(huán)境下,細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜被破壞,釋放出基因組DNA和質(zhì)粒DNA。此時(shí)基因組DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)被破壞,發(fā)生變性。質(zhì)粒DNA也會(huì)發(fā)生變性,但兩條互補(bǔ)鏈仍會(huì)互相盤繞,并緊密的結(jié)合在一起。


    當(dāng)加入溶液3(含醋酸鉀溶液)使pH恢復(fù)中性時(shí),共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA復(fù)性快,而線性的染色體DNA復(fù)性緩慢,細(xì)菌蛋白質(zhì)、破裂的細(xì)胞壁和變性的染色體DNA會(huì)相互纏繞成大型復(fù)合物,被十二烷基硫酸鹽包蓋,從溶液中有效地沉淀下來。經(jīng)過離心除去變性劑后,就可以從上清中回收復(fù)性的質(zhì)粒DNA。


    質(zhì)粒抽提試劑盒中,通常還有 DNA吸附柱,將質(zhì)粒DNA吸附,其他的雜質(zhì)被洗去。最后用洗脫液,將質(zhì)粒DNA洗脫下來。


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