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    大鼠平滑肌細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)方法

    發(fā)布時間: 2022-10-24  點擊次數(shù): 924次

    貼壁法:

    器械
    顯微器械:眼科剪一把,直彎眼科鑷各一把,細(xì)結(jié)鑷一把,手術(shù)刀一把,針頭諾干
    殺老鼠器械:手術(shù)剪一把,大鑷子一把,彎眼科鑷一把,組織鉗一把,50ml燒杯一個(錫紙包好)
    另外:10ml離心管兩個,培養(yǎng)皿兩個,10ml的瓶子三個,小濾器兩個,硅膠板一塊,培養(yǎng)瓶蓋子諾干
    貳。試劑
    D-HANKS液250ml,雙抗2ml(青霉素16萬U/ml鏈霉素15萬U/ml)。FBS和含20%FBS的DMEM
    叁。步驟
    1. 取大鼠,稱重,水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉
    2. 綁好大鼠,先剪開腹腔,剪斷腹部大動脈放血,后剪開胸腔,取肺
    3. 放入燒杯,后移入超凈臺,置于冰盒上。以后的操作皆在冰盒上操作
    4. 倒入已加雙抗的D-HANKS,清洗肺部,扯掉食管,剪掉心臟
    5. 用針頭將肺固定在硅膠板上,硅膠板置于培養(yǎng)皿里
    6. 用鑷子將肺的內(nèi)外膜除去,只剩下平滑肌
    7. 用眼科剪將肺部剪成1-2mm的小碎塊
    8。在培養(yǎng)瓶中加入一到兩滴的FBS,輕搖培養(yǎng)瓶,使血清鋪滿瓶底。
    9。用眼科剪將碎塊放進瓶中,后用滴管將碎塊在瓶里鋪均勻。
    10。將瓶底朝上,放入培養(yǎng)箱中
    11。四個小時后,將瓶子翻回
    這樣處理后,一般五天內(nèi)不用看它,第六天開始,可以加入含20%FBS的DMEM


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