-
昆蟲細(xì)胞的擴(kuò)增
發(fā)布時(shí)間： 2022-12-07 點(diǎn)擊次數(shù)： 851次原理
用機(jī)械法從細(xì)胞單層分離細(xì)胞，在 27°C 條件下和懸浮狀態(tài)下進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)。
材料與儀器
Sf9細(xì)胞 二甲基亞砜 Pluronic F68
生長培養(yǎng)液
培養(yǎng)瓶 旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶和磁力攪拌器 27°C培養(yǎng)箱步驟
常規(guī)維持培養(yǎng)
1. 通過刮取法或用培養(yǎng)液沖洗細(xì)胞（( ATCC # CRL-1711 ) 或從甘藍(lán)環(huán) Trichoplusia ni 獲得的細(xì)胞系（Tn 368 或 BTI-TN-5B1-4，也稱 “High Five "，可從 Invitrogen 購買））法使細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中脫落，或者利用在旋轉(zhuǎn)瓶中懸浮生長的細(xì)胞。
2. 用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞，通過用臺(tái)盼藍(lán)或萘黑染色檢査細(xì)胞的活力。
3. 以 0.5~1×106 個(gè)/ml 活細(xì)胞密度將細(xì)胞種植于旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶內(nèi)，每 500 ml 旋轉(zhuǎn)瓶內(nèi)注入 20~100 ml 細(xì)胞懸液。
4. 在 20~28°C 條件下培養(yǎng)細(xì)胞，以 37°C 為佳。
5. 每 48~72 h 或當(dāng)細(xì)胞密度為 4~5×106 個(gè)/ml 時(shí)，將細(xì)胞稀釋至 0.5~1×106 個(gè)/ml。
6. 每 3~4 周將細(xì)胞移入潔凈的培養(yǎng)瓶。
7. 如果細(xì)胞群聚集，稍微加快攪拌速度，并加入表面活性劑 Pluronic F-68 [ 0.5%~1.0% (v / v ) ]，以降低剪切力。
凍存細(xì)胞
1. 計(jì)數(shù)細(xì)胞，離心（1000 rpm ，約 200 g，5 min )。
2. 用 10% DMSO ( 用 FBS 配制）混懸細(xì)胞，密度為 1×107 個(gè)/ml。
3. 將細(xì)胞分裝入凍存管，然后將凍存管放在冰上 1 h。
4. 將凍存管裝入苯乙烯泡沫容器。
5. 在 -70°C 條件下將凍存管緩慢冷凍過夜（約 1°C /min )。
6. 將凍存管移入液氮凍存器中。
7. 使凍存的細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)，將凍存管在 37°C 迅速融化。如果細(xì)胞以液相儲(chǔ)存，在融化加蓋容器中的細(xì)胞時(shí)應(yīng)注意避免因凍存管破裂而導(dǎo)致受傷的危險(xiǎn)。
8. 將細(xì)胞移入含 5 ml 培養(yǎng)液的 25 cm2 培養(yǎng)瓶。輕拍培養(yǎng)瓶，以便均勻地分散細(xì)胞。
9. 2~3 h 后吸去培養(yǎng)液。當(dāng)大多數(shù)細(xì)胞貼壁時(shí)，加入 5 ml 新鮮培養(yǎng)液。
10. 在分離前將細(xì)胞培養(yǎng) 2~3 天，使細(xì)胞恢復(fù)。然后按前述方法，將細(xì)胞移入攪拌培養(yǎng)瓶或更大的塑料瓶。以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)
- 下一篇：冷胰蛋白酶解離組織
- 上一篇：結(jié)腸直腸腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)
-
血清系列
-
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
-
支原體清除
-
細(xì)胞凍存
-
實(shí)驗(yàn)耗材
-
分子試劑
-
細(xì)胞增殖與凋亡
-
Biozellen系列
-
培養(yǎng)基
-
ELISA試劑盒
-
TOYOBO（東洋紡）
-
ZYMO RESEARCH
-
Greiner（格瑞納）
-
IKA（艾卡）
-
化學(xué)發(fā)光底物（ECL）
-
PROSPEC系列
-
Epigentek系列
-
微生物檢測
-
細(xì)胞生物學(xué)
-
Corning康寧
-
解離試劑
-
細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
-
原代細(xì)胞
-
植物檢測系列試劑盒
-
SERANA
-
細(xì)胞系
-
生化試劑盒
-
環(huán)境檢測系列試劑盒（AKEN）
-
類器官培養(yǎng)
-
緩沖器和解決方案
-
生物三凝膠基質(zhì)
-
細(xì)胞因子分子
-
生物樣本庫
