簡介：
CHO細胞（Chinese hamster ovary cell，CHO）一個轉(zhuǎn)化細胞系，1957年從中國倉鼠卵巢細胞得到。CHO細胞目前是現(xiàn)代制藥企業(yè)進行研發(fā)、生產(chǎn)生物治療藥物 (單抗、酶、激酶和激素等) 中常用的非人類哺乳動物細胞系。

原理：
培養(yǎng)基無特殊要求，可有多種選擇,一般用DMEM（高糖）培養(yǎng)基+10%胎牛血清+2%雙抗。置于37℃,5%CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。每隔48h換液，或當(dāng)培養(yǎng)基呈現(xiàn)熒光黃色及時換液，否則細胞會出現(xiàn)大規(guī)模脫落和變形死亡。

當(dāng)單層培養(yǎng)細胞匯合達90%以后(兩天左右)，棄去培養(yǎng)基，用2ml不含鈣、鎂離子的PBS潤洗2次，用0.5mlPBS+0.5ml 含0.25%ETDA的胰蛋白酶消化1-2min（在培養(yǎng)箱放30s-1min），鏡下觀察變圓或輕輕擊打培養(yǎng)皿側(cè)壁發(fā)現(xiàn)有細胞團塊脫落或皿底花斑狀，用1ml（血清）細胞培養(yǎng)基終止消化，九宮格法吹落細胞收集到離心管，以800-1000rpm，室溫離心5min。

以1:2~1:3的比例傳代，離心棄去廢液，用2ml~3ml（血清）細胞培養(yǎng)基充分重懸細胞沉淀成單個細胞，以“Z"字打入含有7ml培養(yǎng)基的10cm皿中，輕柔十字晃勻不超過十下并靜置數(shù)分鐘后鏡下觀察，平穩(wěn)放入培養(yǎng)箱中。

凍存液的配置為血清：二甲基亞砜(DMSO)=9:1。取長勢良好，匯合度達90%并無污染的細胞，消化離心后用凍存液1.5ml重懸后轉(zhuǎn)移至凍存管中，標(biāo)記好細胞種類、日期、姓名，放入恢復(fù)室溫的梯度凍存盒，一同放置于-80°C冰箱。

準(zhǔn)備好離心管中放入3ml（血清）細胞培養(yǎng)基，并確保水浴鍋打開并達到37℃，從-80℃冰箱取出目標(biāo)凍存管，放入密封袋并在水浴鍋中迅速搖晃解凍<1min，與3mL培養(yǎng)基混合均勻。在800 rpm，離心5分鐘，棄去上清液，用新培養(yǎng)基重懸細胞為單個細胞狀態(tài)，加入10cm皿中，培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

注意事項：

1.CHO細胞對損傷不易耐受，請注意密切觀察。

2.不同胰酶消化速度有差別，根據(jù)經(jīng)驗調(diào)整用量和用時。

3.細胞傳代用PBS洗的目的是去除舊培養(yǎng)基中血清對胰酶的抑制作用。

4.不要將細胞中液體吸凈后放置過久，細胞變干后死亡。

5.細胞消化所用胰酶的最適工作溫度大約在37攝氏度左右，故放入培養(yǎng)箱更好的促進胰酶消化。

6.細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，才能最大限度的保存細胞活力。（細胞保護劑（DMSO）能提高細胞膜對水的通透性，緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶形成造成的細胞損傷。復(fù)蘇時快速融化，避免由于緩慢融化使細胞外結(jié)晶的水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷）。

7.細胞凍存嚴格遵循梯度降溫，不可直接放入低溫冰箱，如果沒有梯度凍存盒，可以4℃ 10-30min，-20℃ 30-1h，-80℃過夜。

8.復(fù)蘇后第二天換液是為了去除殘留凍存液對細胞的傷害。

9.細胞量少或凍存過久的細胞復(fù)蘇到中皿中，等長滿后傳代到大皿中。

安培生物致力成為推動生命科學(xué)進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時為客戶提供服務(wù)。