細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要依附在人工附著物上，大多數(shù)脊椎動物細(xì)胞在人工附著物上會呈現(xiàn)為單層生長的狀態(tài)。

所謂的人工附著物，就是常見的多孔板、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿。

用什么類型的附著物來培養(yǎng)細(xì)胞，是有什么依據(jù)的呢？這一期內(nèi)容就講講這個話題。

基本概念

從材料分類上看，常見的細(xì)胞培養(yǎng)附著物分為一次性的塑料和玻璃。

先說玻璃，成本低、可重復(fù)使用，透光性好，但由于其清洗過程復(fù)雜，不易保存，現(xiàn)在已逐漸被一次性塑料取代了。

一次性塑料的主要成份是聚丙乙烯，由人工合成，質(zhì)地均勻，產(chǎn)量大成本低，能為細(xì)胞提供一個良好的生長表面。

這里有一個小細(xì)節(jié)，有的塑料培養(yǎng)器皿會標(biāo)注“已表面處理“，這是什么意思呢？

因為聚丙乙烯生產(chǎn)好以后，其表面是疏水性的，這不利于細(xì)胞貼壁生長，因此，需要進行特殊的工藝處理，例如射線照射、電離輻射，這樣處理過的表面細(xì)胞才能更好的貼在上面生長。

選擇器皿的原則

選擇用多孔板培養(yǎng)細(xì)胞還是培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞，是根據(jù)你培養(yǎng)細(xì)胞的目的來決定的。

如果培養(yǎng)細(xì)胞的目的是通過細(xì)胞倍增，最終獲得大量細(xì)胞或細(xì)胞分泌物，則應(yīng)該使用培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶來培養(yǎng)細(xì)胞。

如果目的是為了進行微量的、多次的重復(fù)實驗來分析細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物，則應(yīng)該使用多孔板來培養(yǎng)。

確定培養(yǎng)目的以后，應(yīng)該根據(jù)具體情況選擇不同規(guī)格的器皿。以下分類說明。

1 選擇培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)胞

首先，根據(jù)期望獲得的細(xì)胞產(chǎn)量來選擇，培養(yǎng)瓶是通過表面積來命名的，例如T25、T75、T175，數(shù)字就是表面積，25就是25cm2，如此類推；

培養(yǎng)皿是按照其直徑來命名的，例如3.5cm、9cm。以下，是按照不同規(guī)格的培養(yǎng)器皿所能培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)量繪制的參考圖，有興趣的同學(xué)可以保存下來以后用。

其次，根據(jù)實驗操作熟練程度來選擇，培養(yǎng)皿的操作比較方便，不管是換液、傳代、還是收獲細(xì)胞，但因為其開口很大，所以容易污染，如果你是新手，不建議直接用培養(yǎng)皿養(yǎng)細(xì)胞。

最后，如果選擇培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，還應(yīng)該盡量選擇有斜肩設(shè)計、帶透氣孔瓶蓋的型號。

前者可以避免培養(yǎng)瓶平放后，過多的培養(yǎng)基接觸瓶蓋造成污染，后者可以保持內(nèi)外的二氧化碳濃度一致。

如果瓶蓋不透氣，那在放進培養(yǎng)箱時，應(yīng)擰松一圈，以便內(nèi)外氣體能順利交換。

2 選擇多孔板培養(yǎng)細(xì)胞

首先，也是要判斷你的實驗需要多少細(xì)胞來進行分析，以此來選擇多孔板的規(guī)格。大家同樣可以參照上面的圖表。

有極個別的孔板，孔底部是錐形底或圓底，這種規(guī)格的多孔板適用于非組織型的細(xì)胞培養(yǎng)，對于大多數(shù)貼壁生長的細(xì)胞來說不適合。

選擇好合適的孔板后，在培養(yǎng)階段，有2點注意事項：

A 多孔板會帶板蓋，但其密封性不好，在培養(yǎng)箱內(nèi)會造成邊緣的孔位蒸發(fā)效率過高，進而影響細(xì)胞生長速率。

有條件的同學(xué)，可以在蓋上板蓋后在縫隙處貼一圈封口膜。或者舍棄邊緣孔位，并采用添加培養(yǎng)基來代替。

B 當(dāng)細(xì)胞種入孔內(nèi)以后，不應(yīng)該再進行過多的震動，例如晃動、抖動培養(yǎng)板，而應(yīng)該輕緩的放入培養(yǎng)箱中。

如果培養(yǎng)箱由多人共用，還應(yīng)該考慮大家頻繁開關(guān)箱門、拿放孔板造成的震動，這些不利因素都應(yīng)該盡量減少。

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